进入微生物室的物品通过传递窗，经过紫外消毒后进入微生物室。为了确认传递窗紫外灯的消毒效果，特起草本方案对其进行验证。本验证用于QC微生物室、无菌室传递窗紫外灯表面消毒效果检查。

3.1灭菌刻度吸管（1ml，10ml）

3.2灭菌试管

3.3灭菌平皿

3.4酒精灯

3.5载体：（1.0×1.0cm的玻片）

4.1纯化水 

4.2营养琼脂培养基

4.3改良马丁琼脂培养基

4.4营养肉汤培养基

4.5改良马丁培养基

4.6金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]

4.7枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]

4.8大肠杆菌[CMCC（B）44 102]

4.9白色念珠菌[CMCC（F）98 001]

4.10稀释液（0.1％吐温80，0.1％蛋白胨溶液）

5.1 试验环境

试验在洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行，全过程严格遵守无菌操作。单向流空气区、工作台面及环境定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

每次操作开始前，开紫外灯照射1小时。

5.2 培养基的制备

5.2.1营养琼脂培养基
配方：

营养琼脂培养基粉  31.0g

纯化水            1000ml

配制：

根据需要量称取营养琼脂培养基粉置适宜容器中，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至7.1±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌121℃×15分钟。

5.2.2 改良马丁琼脂培养基
配方：

改良马丁琼脂培养基粉    42.0g

纯化水                         1000ml

配制：

根据需要量称取改良马丁琼脂培养基粉，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至6.4±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌115℃×20分钟。

5.2.3 营养肉汤培养基
配方：

营养肉汤培养基    20g

纯化水            1000ml

配制：

称取营养肉汤培养基20克，加1000ml纯化水，加热溶解，加热至沸，冷却至常温，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌121℃×15分钟。

5.2.4改良马丁培养基
配方：

改良马丁培养基粉    28.0g

纯化水              1000ml

配制：

根据需要量称取改良马丁培养基粉，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至6.4±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌115℃×20分钟。

5.3方法验证试验

5.3.1辐照强度测定

5.3.1.1开启紫外灯5min后，用中心波长为253.7nm的紫外线强度测定仪在灯管下方垂直1m的中心处测量其辐照度值（uW/cm²）。

5.3.1.2测量时，电压应稳定在220V。

5.3.1.3普通型或低臭氧型直管紫外线灯（30W），在灯管下方垂直1m的中心处，新灯管的辐照度值应≥90 uW/cm² 。使用中的灯管的辐照度值应≥70 uW/cm² ，低于此值者应予更换。

5.3.2 照射剂量

表面消毒接受的照射剂量，应达杀灭目标微生物所需。对大肠杆菌，照射剂量应达到7.5×103 uW·s/cm²,对金黄色葡萄球、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌应达到2.53×104uW·s/cm²。

5.3.2.1照射剂量计算：

照射剂量（uW·s/cm² ）＝紫外灯管强度（uW/cm²）×时间（s）

5.3.3  细菌及其芽孢和真菌杀灭效果的测定

5.3.3.1菌液的制备   

金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌培养后，将菌液进行活菌计数。

5.3.3.2 将灭菌载体平放于灭菌平皿内，每个载体滴注定量菌悬液，（载体回收菌量达5×105～5×106 cfu/片），涂匀，放37℃培养箱烘干。开启紫外灯5min后，将16个染菌玻片平放于灭菌平皿内，水平放于适当距离照射，于4个不同间隔时间（15min、30 min、45 min、60 min）各取出4个染菌玻片，分别投入4个盛有5ml洗脱液试管中，振打80次。

5.3.3.3经适当稀释后，取1ml洗脱液，作平板倾注，每个染菌玻片接种两个，细菌放30～35℃培养48小时作活菌计数，真菌放23～28℃培养72小时作活菌计数。

5.3.3.4阳性对照，除不做照射处理外，取4个染菌玻片，分别投入4个盛有5ml洗脱液试管中，振打80次。余按7.4.2.3同样操作。

5.3.3.5计算杀灭率         

杀灭率（％）＝（阳性对照回收菌数－试验组回收菌数）/阳性对照回收菌数 ×100％

5.3.3.6判定标准对指示菌杀灭率≥99.9％判为消毒合格。

附件1. 试验菌数量测定原始记录

传递窗构造或紫外灯管放置位置发生改变时。

QA必须参与验证的评审阶段；
QA必须审阅最终报告（包括草案）；

QA审阅者不应是参与实施的其他QA人员。

在实施过程中，如果方案需要修改，必须提交书面的报告，阐述修改的原因，修改的内容，并经过验证小组负责人及QA的认可。修改后的方案同先前执行的方案一起归档。

所有的相关文档都应该保留至少5年，这些文档应包括如下内容：

原始方案、修改后的方案（如果有的话）、偏差报告、原始数据、原始报告和最终报告、其中，报告应该包括以下内容：

记录的原件（或复印件）、测试项目及条款、实验开始和结束的日期、材料和方法描述、出现的偏差描述（如果有的话）、实验结果。