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【传经送宝】中国GB4789.3-2016大肠菌群计数检测要点解析！
2023-11-24 17:58:08 点击量:
一、大肠菌群定义和卫生学意义
大肠菌群定义：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。大肠菌群不是细菌学上分类命名，它不代表某一种或某一属的细菌，而是一组与粪便污染有关的细菌。这群细菌包括：埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属、肠杆菌属（又叫产气杆菌属，包括阴沟肠杆菌和产气肠杆菌）和等。
卫生学意义：大肠菌群作为粪便污染的指标菌评价样品中是否受到粪便的污染。表示了对人体健康是否具有潜在的危险性。直接反映了样品受粪便污染的的程度。
二、GB4789.3-2016大肠菌群MPN法
1. 什么是MPN法？
•MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度,应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。
•MPN值并不能表示实际菌落数， 实际菌落数有可能落在置信区间内的任何一点，MPN值是落在这个置信区间内概率最大的一点。
•灵敏度较高，适用于污染菌落较少的样品。
2.大肠菌群MPN计数的检验操作
操作注意事项
1:建议用磷酸盐缓冲液作为稀释液，因为磷酸盐缓冲液能更好地纠正食品样品中pH变化，对细菌具有保护作用。
2:初发酵接种量超过1mL,则用双料LST肉汤。
3:培养基检查。加入样品前应观察导管内是否有气泡，若有，应适当倾斜试管，让气体排出。
4:结果观察。某些食品样品可能会堵塞小导管底部，影响导管内气泡的观察，可将试管微微倾斜，用手指轻弹管壁，观察是否有一串小气地沿管壁升起， 若有，则判定气。
3. 培养基原理解析
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）
•月桂基硫酸盐能抑制革兰氏阳性菌生长，胰蛋白胨提供碳源和氮源满足细菌生长的需求；氯化钠可维持均衡的渗透压；乳糖是大肠菌群可发酵的糖类；磷酸二氢钾和磷酸氢二钾是缓冲剂。
•36±1℃培养24h后若已产气，则可停止培养。如果没有观察到有产气的现象，则继续培养至48±2h。
•如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤。
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煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）
•胆盐与煌绿均能抑制革兰氏阳性菌生长。
•培养基配方当中含有胆盐，大肠菌群发酵乳糖所产的酸会与胆盐发生反应，形成胆酸沉淀。培养基可由原来的绿色变为黄色。