大豆制品中尿素酶活性测定方法

2014-08-21 14:30:35  点击量:

　　来源：中国农业网 时间：2004-12-12 11:27:16
 

　　1 适用范围

　　本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中尿素酶活性的测定。本法可确认大豆制品的湿热处理程度。

　　2 定义

　　本标准所指尿素酶活性定义如下：

　　在30±0.5℃和pH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。

　　3 原理

　　将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。

　　4 仪器设备

　　4.1 样品筛：孔径200μm;

　　4.2 酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置;

　　4.3 恒温水浴：可控温30±0.5℃;

　　4.4 试管：直径18mm，长150mm，有磨口塞子;

　　4.5 精密计时器;

　　4.6 粉碎机：粉碎时应不生强热(例如球磨机)

　　4.7 分析天平：感量0.1mg;

　　4.8 移液管：10mL。

　　5 试剂和溶液

　　5.1 尿素(GB 696─77)：分析纯;

　　5.2 磷酸氢二钠(GB 1263─77)：分析纯;

　　5.3 磷酸二氢钾(GB 1274─77)：分析纯;

　　5.4 尿素缓冲溶液(pH6.9至7.0)：4.45g磷酸氢二钠(5.2)和3.40g磷酸二氢钾(5.3)溶于水并稀释至1000mL，再将30g尿素(5.1)溶在此缓冲溶液中，可保存1个月。

　　5.5 盐酸(GB 622─77)：分析纯，c(HCl)=0.1mol/L溶液;

　　5.6 氢氧化钠(GB 629—77)：分析纯，c(NaOH)=0.1mol/L标准溶液，按GB 601标准溶液制备方法的规定配制。

　　6 试样的制备

　　用粉碎机(4.6)将10g试样粉碎，使之全部通过样品筛(4.1)。对特殊试样(水分或挥发物含量较高而无法粉碎的产品)应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。

　　7 测定步骤

　　称取约0.2g已粉碎的试样，称准至0.1mg，转入试管(4.4)中(如活性很高只称0.05g试样)，移入10mL尿素缓冲溶液(5.4)，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于30 ±0.5℃恒温水浴(4.3)中，准确计时保持30min。即刻移入10mL盐酸溶液(5.5)，迅速冷却到20℃。将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液(5.3)滴定至pH4.70。

　　另取试管作空白试验，移入10mL尿素缓冲液(5.4)， 10mL盐酸溶液(5.5)。称取与上述试样量相当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动。将试管置于30±0.5℃恒温水浴,同样准确保持30min，冷却至20℃，将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标 准溶液(5.3)滴定至pH4.70。

　　8 测定结果的计算

　　8.1 计算方法

　　以每分钟每克大豆制品释放氮的毫克量表示的尿素酶活性U，按下式计算 ： U=14×c(V0-V)/(30×m)

　　式中：c── 氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L;

　　V0── 空白试验消耗氢氧化钠溶液体积，mL;

　　V── 测定试样消耗氢氧化钠溶液的体积，mL;

　　m── 试样质量，g。

　　注：若试样经粉碎前的预干燥处理时，则 U=〔14×c(V0-V)/(30×m)〕×(1-S)

　　式中：S──预干燥时试样失重的百分率。

　　8.2 重复性

　　同一分析人员用相同方法，同时或连续两次测定结果之差不超过平均值的10%，以其算术平均值报告结果。

 

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